不同储藏条件下余甘子中单宁酸、β-PGG、没食子酸含量的变化及分析(2)

　　1.3 方法

　　1.3.1 没食子酸、单宁酸、β-PGG对照品溶液的制备

　　精密称定没食子酸对照品0.40mg,用50%甲醇制成40ug/ml的溶液，备用。精密称取0.60 mg单宁酸对照品，用乙醇、水、丙酮（70：29：1）溶液溶解并定容，制备成浓度为60ug/ml的单宁酸标准溶液，备用。精密称定β-PGG对照品1 .00mg,用甲醇制成100ug/ml的溶液，备用。

　　1.3.2没食子酸、单宁酸、β-PGG供试品溶液的制备

　　没食子酸、单宁酸、β-PGG供试品溶液的制备：取25克去核余甘子果肉，精密称定，加入适量石英砂研磨，尽量捣碎，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，称定重量，加热回流1.5小时,70°C。放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45um滤膜过滤。即得。

　　1.3.3  没食子酸含量测定方法

　　1.3.3.1 没食子酸色谱条件;

　　色谱柱为Agilent C18ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm, 5 um）；以甲醇-0.2%磷酸溶液（5：95）为流动相；检测波长为273 nm；柱温：25℃；进样量：10μl。

　　1.3.3.2 没食子酸线性关系考察

　　精密称取对照品0.50 mg，用50 %的甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，摇匀作为储备液摇匀作为储备液。按上述没食子酸色谱条件分别取3、5、7、9、11 ul不同体积进样，以没食子酸的峰面积（Y）对标准品的质量（X）进行线性回归，得方程y=1233.1x+23.701，r=0.9983,结果表明：没食子酸峰面积值与质量有良好的线性关系，线性范围为0.15-0.55 ug。

　　1.3.4 单宁酸含量测定方法

　　1.3.4.1 单宁酸色谱条件

　　色谱柱为Agilent C18ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm, 5 um）；以甲醇-水（80：20）为流动相；检测波长为275 nm；柱温：25℃；进样量：2.0μl。

　　1.3.4.2 单宁酸线性关系考察

　　精密称取对照品0.80mg，用乙醇、水、丙酮（70：29：1）溶液溶解并定容至10 ml容量瓶中，摇匀作为储备液。按上述单宁酸色谱条件分别取3、5、7、9、11 ul不同体积进样，以单宁酸的峰面积（Y）对标准品的质量（X）进行线性回归，得方程y=7281.2x+90.702，r=0.9999。结果表明：单宁酸峰面积值与质量有良好的线性关系，线性范围为0.24-0.88ug。

　　1.3.5 β-PGG 含量测定方法

　　1.3.5.1 β-PGG色谱条件

　　色谱柱为Agilent C18ZORBAX SB-C18柱（4.6×250 mm, 5 um）；流动相：0min:乙腈-0.1%磷酸（10:90）,15 min: 乙腈-0.1%磷酸（25:75）,15.1 min: 乙腈-0.1%磷酸（25:75）,20 min：乙腈-0.1%磷酸（25:75）；检测波长为281 nm；柱温：25℃；进样量：20μl。

　　1.3.5.2 β-PGG线性关系考察

　　精密称取对照品1.0 mg，用50 %的甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，摇匀作为储备液摇匀作为储备液。按上述没食子酸色谱条件分别取13、15、17、19、21ul不同体积进样，以β-PGG的峰面积（Y）对标准品的质量（X）进行线性回归，得方程y=2195.0x-47.357，r=1.0。结果表明：PGG峰面积值与质量有良好的线性关系，线性范围为1.3-2.1 ug。