蠲痹颗粒对胶原诱导性小鼠关节炎Th1/Th2/Th17细胞因子表达谱的影响*(4)

　　4. 讨论

　　蠲痹颗粒是著名中医学家吴佩衡学术继承人，云南省名老中医吴生元教授基于扶阳理论，总结出治疗类风湿关节炎有效良方，该方主要由附片、川芎、赤芍、桂枝、麻黄、薏苡仁、五加皮等10余味中药组成，具有温经散寒、祛风除湿、通络止痛之功，主治寒湿痹阻之类风湿关节炎。蠲痹颗粒的临床研究显示：蠲痹颗粒能明显改善RA活动期(风寒湿痹证)的临床症状，降低CRP、ESR、RF滴度等指标，总有效率达82.5%[1]。实验研究表明，蠲痹颗粒不仅具有明显的抗炎、免疫抑制作用，而且对大鼠佐剂性关节炎具有显著的治疗作用[2]。为此，在前期研究的基础上，进一步在人类RA的实验动物模型—牛II型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎疾病动物模型上，研究蠲痹颗粒对胶原诱导性小鼠关节炎的抑制作用及初步机制。胶原诱导性关节炎模型是研究类风湿性关节炎发病机制和治疗药物筛选的理想模型，也是目前国际上公认的关节炎模型[3]。

　　研究结果表明，蠲痹颗粒能改善CIA的临床症状和组织病理学的表现，阻止关节炎的发生发展。该实验研究结果进一步佐证了中医学家吴佩衡及学术继承人云南省名老中医—吴生元教授应用扶阳理论治疗痹证(风寒湿痹)临床中药优效科学性。CIA是一种主要由T细胞介导的免疫反应[3]。因此我们采用3H-thymidine掺入法检测蠲痹颗粒对CIA小鼠脾淋巴细胞增殖功能的影响。结果表明，蠲痹颗粒口服给药对CII(胶原)诱导的增殖反应具有明显的抑制作用，提示蠲痹颗粒能够抑制胶原诱导的抗原特异性免疫反应。

　　在机体的免疫反应中，T淋巴细胞发挥着重要作用，T淋巴细胞不仅是细胞免疫功能的承担者，而且也是免疫应答的调节者。自身免疫性的T淋巴细胞激活和增殖参与到多种自身免疫性疾病的发病机制中，其中包括类风湿关节炎 [4-5]，未致敏的CD4 T细胞经抗原刺激活化后成为CD4+T淋巴细胞，CD4+T淋巴细胞在不同因素作用下，进一步向Th1、Th2、Th17、Treg等功能性细胞类型分化，其平衡失调与RA的发生、发展密切相关[6]。

　　Cytometric Bead Array (CBA) 系统就是利用流式细胞仪荧光检测灵敏度高的特点，通过微球表面免疫分析，达到检测可溶性蛋白的目的。CBA 优点为检测范围广、减少样品稀释，节省检测时间，与ELISA 相比灵敏度高、重复性好，且能够同时对单个样本进行多种检测。CBA检测结果表明，蠲痹颗粒显著下调胶原诱导的脾淋巴细胞IL-17A的产生水平，而对Th1/ Th2型4种细胞因子(IFN-g， IL-4，IL-6，TNF-a)无明显变化。IL-17A 是Th17细胞主要效应因子，与其受体结合后，主要通过活化MAP激酶，激活核因子(NF-kB)的活性从而发挥IL-17的生物学活性。IL-17A，是一种强力促炎细胞因子，主要通过以下机制介导炎症损伤[7]：①诱导促炎细胞因子(IL-6、TNF-a)、趋化因子(CXCL1、GCP-2、IL-8、MCP-1)和基质金属蛋白酶(MMP)的表达，引起炎症细胞的浸润和组织损伤;②募集中性粒细胞，参与中性粒细胞的增殖、成熟和趋化，对T细胞的活化起协同刺激作用[8];③增加前列腺素E2(PGE2)。基于上述分析，提示蠲痹颗粒可能通过下调Th17细胞相关信号通路，抑制促炎细胞因子IL-17A的产生，从而阻止类风湿关节炎的发生与转归。因此有必要进一步深入研究蠲痹颗粒对Th17细胞上游转录因子及分化的影响，从而揭示“温阳理论治疗痹证 (风寒湿痹)”理论的现代生物学特征及内在规律，丰富和发展中医治疗痹证理论的科学内涵。

　　参考文献

　　[1] 彭江云,李兆福,刘维超,吴洋,狄朋桃,崔世奎.蠲痹颗粒治疗类风湿关节炎临床疗效观察[J].中国中医风湿病学杂志,2009,30(12):12-14.

　　[2] 彭江云,李兆福,杨洲,刘维超.蠲痹颗粒抗炎镇痛作用的实验研究[J].中国中医骨伤科杂志,2009,17(11):52-53.

　　[3] 周茹,杨以阜,左建平.II型胶原诱导的小鼠关节炎动物模型的建立及影响因素[J].中国药理学通报,2006,22(12):1532-5.

　　[4]Xiao BG,Link H.Antigen-specific T cells in autoimmune disease with a focus on multiple sclerosis and experimental allergic encephalomyelitis[J].Cell Mol Life Sci,1999,56:5-21.

　　[5]Vander Borght A,Geusens P,Raus J,Stinissen P.The autoimmune pathogennesis of rheumatoid arthritis:Role of autoreactive T cell and new immunotherapies[J].Semin Arthritis Rheum,2001,31:160-175.

　　[6]King C,Tangye SG, Mackay CR.T follicular helper (TFH) cells in normal and dysregulated immune responses[J].Annu Rev Immunol,2008,26:741-766.

　　[7]Estelle Bettelli,Thomas korn,Mohamed Oukka,Vijay K.Kuchroo.Induction and effector functions of TH17 cells[J].Nature,2008,453(19):1051-1057.

　　[8]Ferretti.S,Bonneau.O,Dubois,G.R,Jones,C.E.&Trifilieff,A.IL17,producedby lymphocytes and neutrophils,is necessary for lipopolysaccharide-induced airway neutrophilia:IL-15 as a possible trigger [J].J.immunol, 2003,170:2106-2112.