蠲痹颗粒对胶原诱导性小鼠关节炎Th1/Th2/Th17细胞因子表达谱的影响*

　　万春平1，彭江云2▽,李兆福2，狄朋桃2，刘维超2，吴晶晶2，李玲玉，2杨会军2

　　1 云南中医学院第一附属医院中心实验室，云南昆明 650021

　　2 云南中医学院第一附属医院风湿科，云南昆明 650021

　　目的：研究蠲痹颗粒对胶原诱导性小鼠关节炎的抑制作用及Th1/Th2/Th17细胞因子表达谱的影响，为其临床应用奠定理论基础。

　　方法：建立牛II型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎(collagen induced arthritis，CIA)模型，按临床评分平均分为CIA模型组，阳性药MTX组，蠲痹颗粒组。关节炎临床评分法观察CIA小鼠关节炎发病严重程度;石蜡切片H&E染色分别测定CIA小鼠关节炎病理损伤程度。3H-thymidine掺入法检测CIA小鼠胶原特异性免疫应答水平，采用Cytometric Bead Array (CBA) 法检测胶原诱导的脾淋巴细胞Th1/Th2/Th17 5种细胞因子(IFN-g， IL-4，IL-6，TNF-a，IL-17A)表达水平。

　　结果：蠲痹颗粒能显著降低CIA小鼠胶原关节炎的临床评分，明显改善CIA小鼠局部关节炎的症状，减轻炎症细胞浸润;同时抑制CIA小鼠胶原特异性免疫反应(P<0.01)，下调胶原诱导的脾淋巴细胞IL-17A的产生水平(P<0.05)，然而对细胞因子IFN-g 、IL-4、IL-6、TNF-a无明显影响(P>0.05)。

　　结论：蠲痹颗粒对胶原诱导性小鼠关节炎具有防治作用，其机制可能与抑制Th17细胞(IL-17A)有关。

　　关键词：蠲痹颗粒;类风湿关节炎;胶原关节炎;Th1细胞;Th2细胞;Th17细胞

　　作者简介：万春平(1981-)，汉族，博士学位,主要研究方向：免疫药理学。

　　▽通讯作者：彭江云(1961-)，汉族，主任医师、教授，云南省名中医，主要研究方向：中医药防治风湿病的研究。

　　*基金项目：云南省科技计划重点新产品开发计划项目(NO2012BCO10)、云南省自然科学基金项目(2011FZ253)和云南省自然基金青年项目(编号：2012FD097)

　　蠲痹颗粒是云南省名老中医吴生元教授历经数十年丰富临床经验总结的有效良方，是在潜心研习著名中医学家吴佩衡学术思想基础上的继承和发展。临床

　　研究显示：蠲痹颗粒能明显改善RA活动期(风寒湿痹证)的临床症状，降低CRP、ESR、RF滴度等指标，总有效率达82.5%[1]。实验研究表明，蠲痹颗粒不仅具有明显的抗炎、免疫抑制作用，而且对大鼠佐剂性关节炎具有显著的治疗用[2]。本研究旨在人类RA的实验动物模型—牛II型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型上，进一步探讨蠲痹颗粒对Th1/Th2/Th17细胞因子表达谱的影响。

　　1. 实验材料

　　1.1 实验动物

　　来源，种系，品系： DBA/1小鼠，7-8周龄，体重20-22g，雄性，成都达

　　硕生物科技有限公司提供，合格证号：SCXK(川)2008-24;动物饲养在SPF级动物房，实验动物至少饲养一周后使用。温度22±1℃，湿度55±5%，12小时光暗循环。饲料和水均在消毒后由动物自由摄取。所有实验均严格按照实验动物有关条例进行。

　　1.2 主要药物与试剂

　　蠲痹颗粒浸膏每克含生药量为1.14克，由云南省中医医院制剂中心提供;MTX购自上海信宜药厂;牛II型胶原、弗氏完全佐剂(CFA)购自Sigma公司(St.Louis.MO，USA);Cytometric Bead Array检测试剂盒购自BD PharMingen 公司(San Diego，CA，USA);3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-thymidine)购自中国科学院上海原子核研究所;RPMI-1640培养基购自GibcoBRL公司 (life Technologies，Grandisland，NY，USA);其他试剂为国产分析纯。