2.2.2标准曲线的建立
精密称取克班宁对照品2.5mg，加入伯洛沙姆0.075mg，用10%HCL调pH至4~5，用PBS溶液定容至25ml，超声30min使其溶解，得0.1mg/ml的克班宁对照品溶液。分别精密吸取0.1mg/ml的克班宁对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2加PBS缓冲液定容至10ml，用PBS缓冲液做空白对照，采用紫外分光光度计在280nm处测定以上6份克班宁对照液的吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，克班宁浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程A=0.0667C+0.0093(R=0.9991)，可见克班宁在2~12μg/ml范围内与吸收度呈现良好的线性关系。结果见表1、图4。
表1 以PBS做对照克班宁标准品吸光度
2.3葡聚糖凝胶柱层析法测定包封率
2.3.1洗脱曲线的绘制
取2.5g葡聚糖凝胶Sephadex G-50，用150mlPBS缓冲溶液溶胀24h以上，湿法装柱(玻璃柱，径高比2/13)。精密量取浓度为1mg/ml的克班宁脂质体5ml定容至10ml，稀释为浓度为0.2mg/ml的克班宁脂质体，从中取3ml上柱，用PBS缓冲溶液洗脱，流速1ml/min，每流份2ml，共收集55份[4];每份用无水乙醇破乳定容至10ml，以无水乙醇为对照，在280nm处测定吸光度，以吸光度(A)为纵坐标，收集份数(N)为横坐标绘制含药脂质体的洗脱曲线。精密量取空白脂质体于相同条件下洗脱，绘制空白脂质体的洗脱曲线。结果见图5。
图5 含药脂质体(系列1)及空白脂质体(系列2)洗脱曲线
由洗脱曲线可知：①收集液中第1份到第5份是洗脱液，第6份到第12份共14ml为克班宁脂质体，第13到第55份为未包封的游离药物。②空白脂质体由于本身吸光度较小，所以将其对克班宁脂质体溶液的影响忽略不计。
2.3.2包封率的测定
精密吸取克班宁脂质体用PBS稀释至25ml，取3.0ml，上柱洗脱，收集含药脂质体的洗脱液，用无水乙醇破乳至50ml。精密吸取克班宁脂质体3.0ml直接用无水乙醇定容至50ml。用无水乙醇作为空白校正，分别测定各自吸光度，代入标准曲线计算脂质体中药物含量M和总的样品中药物的含量 ,计算包封率(Encapsulation efficiency，EE)[5]。
