陈玲玲 马云淑 李媛 晏菲 汪波
(本论文荣获“第四届兰茂论坛”优秀论文三等奖)
摘要：目的：研究克班宁(Crebanine,Cre)脂质体的处方筛选和制备工艺。方法：采用氯仿注入法制备的Cre脂质体，以包封率为测试指标，采用葡聚糖凝胶层析法分离脂质体，用紫外分光光度法测定克班宁含量，采用正交设计优化制备工艺。结果：最佳处方工艺为药脂比为1:35、胆固醇与磷脂比为1:12、水浴温度为50℃、超声时间为21min。结论：此工艺条件下，包封率可达81.17%，粒径可达到预期效果，质量达到要求，此工艺可行。
关键词：克班宁; 脂质体; 氯仿注入法; 制备工艺
Preparation of Crebanine liposomes
Chen Lingling, Ma Yunshu*, Li Yuan , Yan Fei , Wang Bo
1. Baoshan College of Traditional Chinese Medicine, 2. Yunnan University of TCM, school of Pharmacy, Kunming, 650500
Abstract: Objective: To study the prescription screening and preparation process of Crebanine liposomes. Methods: Crebanine liposomes were prepared by chloroform injection method, with the entrapment efficiency as the test index, Liposomes were separated by Sephadex gel chromatography, the content of Crebanine was determined by ultraviolet spectrophotometry, the orthogonal design was used to optimize the preparation process. Results: The best prescription process was, drug to lipid ratio of 1:35, cholesterol to phospholipid ratio of 1:12, bath temperature at 50℃, Ultrasonic time was 21min. Conclusion: Under this process condition, entrapment efficiency of up to 81.17%, particle size can achieve the desired effect, quality to meet the requirements, this process is feasible.
Keywords : crebanine; liposomes;Chloroform injection method;Preparation technology
克班宁(Crebanine,Cre)是一种异喹啉类阿朴菲型生物碱，主要存在于防己科千金藤属(Stephania)云南地不容(Stephanina Yunnanensis H.S.Lo)及其它几种同属植物中。药理学实验表明Cre(5 mg/kg 与2.5mg/kg)具有良好的抗实验动物心律失常活性。但其静脉注射的半数致死量(LD50)为9.382mg/kg[1]，治疗指数较小，有较大的毒性，同时Cre不够稳定，见光、高温易氧化变色，因而限制了Cre的开发应用。本文考察了Cre脂质体的制备工艺，为合理利用千金藤属植物资源，开发疗效确切、副作用小的抗心律失常新药提供实验依据与研究思路。
1、实验材料
1.1仪器
WFZ UV-2000型紫外外可见分光光度计(尤尼科上海仪器有限公司);双头磁力加热搅拌器(常州国华电器有限公司 HJ-2A);ZFQ85A旋转蒸发仪;DHG -9023A型电热恒温鼓风干燥箱(北京市永光明医疗仪器厂);DZKW-s-4电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂);BT25S电子分析天平(赛多力斯科学仪器北京有限公司;d=0.01 mg); UV~2401紫外扫描仪;超声波清洗机SY5200-T(上海声源超声波仪器设备有限公司)，GEM1011型电子透射扫描仪，纳米激光粒度仪(济南微纳 winner8C1)。
1.2 药品与试剂
克班宁(Crebanine, Cre 实验室自制，纯度98.7%);大豆卵磷脂(上海伯奥生物科技有限公司);胆固醇(上海新兴化工试剂研究所);磷酸氢二钠(AR天津市博迪化工有限公司));磷酸二氢钠(AR广东光华化学厂有限公司);葡聚糖凝胶G~50(100~300um)北京奇松生物科技有限公司);氯仿(AR云南汕滇制药厂);无水乙醇(AR 天津市大茂化学试剂厂)等，试剂均为分析纯。
2 .方法与结果
2.1克班宁脂质体的制备[2]：
称取卵磷脂100mg和胆固醇6.67mg于烧杯中，加入氯仿1~2ml，于旋转蒸发仪中40℃轻轻旋转使氯仿液在杯壁上成膜，待氯仿挥干后，加入10ml克班宁对照品溶液，继续水化20min，随后进行水浴超声13min，冷却至室温，形成脂质体。称取100mg卵磷脂和6.67mg胆固醇溶于1~2ml氯仿中，将溶有克班宁的PBS溶液加热至55℃左右，将氯仿溶液缓慢注入到克班宁PBS溶液中并不断搅拌，持续加热至氯仿全部挥发制成脂质体，超声10mim，过0.45μm微孔滤膜即得。空白脂质体的制备[3]，称取卵磷脂100mg和胆固醇6.67mg加入氯仿1~2ml，置于旋转蒸发仪中40℃轻轻旋转使其在杯壁上成膜，将氯仿完全挥去。加入经过保温的PBS缓冲溶液10ml，在水浴中充分搅拌水化，随后进行水浴超声13min，即得空白脂质体。
2.2 包封率测定条件及方法的建立
2.2.1 UV测定波长的选择与空白脂质体干扰的确认
分别精密吸取低温保存的克班宁、克班宁脂质体和空白脂质体溶液，在200nm到800nm之间做紫外扫描，结果见图1、2、3可知在280nm处克班宁脂质体有最大吸收峰，而空白脂质体无吸收峰，因此选择UV测定波长280nm。
