4、讨论
大量的研究表明，Treg、Th17细胞都来源于初始T细胞，其功能和分化过程相互对抗，在正常情况下两者保持平衡，有利于机体的免疫稳定状态的维持。在炎症反应、自身免疫性疾病时，促炎症细胞因子的过度表达通过影响初始T细胞的分化格局，增加Th17细胞的分化，破坏Th17细胞/ Treg之间的平衡，导致一系列炎症反应和组织损伤，其中TGF-b、IL-6是连接Treg与Th17最关键的细胞因子[4-6]。在体外研究中，TGF-b通过诱导Foxp3的表达，拮抗RORgt的功能，从而抑制Th17细胞分化[7]。在炎症反应、感染时，IL-6抑制Treg分化，与TGF- b联合诱导初始CD4+T向Th17细胞分化[6]。总之，Treg、Th17细胞功能和分化过程具有共同之处却又相互对抗，其平衡失调影响着RA发生与转归。
温阳散寒除湿方（蠲痹颗粒）的临床及实验研究表明，蠲痹颗粒具有良好的临床疗效，且对大鼠佐剂性关节炎（AA）和CIA小鼠胶原关节炎有显著抑制作用，作用机制可能通过诱导非特异性抑制性细胞因子IL-10的产生而发挥负性调节作用，从而阻止RA的发展与转归。基于此，本研究进一步在牛II型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎疾病动物模型上，探讨蠲痹颗粒醇提物通过Treg/Th17细胞介导治疗类风湿关节炎的作用机制。与前期研究一致，蠲痹颗粒醇提物明显阻止关节炎滑膜炎、淋巴细胞浸润和关节损和临床评分。流式检测结果表明，蠲痹颗粒醇提物干预后显著下调介导炎症作用Th17细胞表达，上调具有免疫抑制作用Treg细胞表达水平，即维持着Th17细胞/ Treg之间的平衡。Th17细胞亚群是一种与IL-23相关且能分泌IL-17新发现Th亚群，主要分泌IL-17A，IL-17F，IL-21等，其主要介导机体的炎性反应（防御胞外病原菌的感染）、自身免疫性反应等的发生和发展，具有高致病性[8]。转录因子RORgt在Th17产生和分化过程中起重要调控作用[9]。qPCR结果显示，蠲痹颗粒醇提物药物干预后显著下调Th17相关基因IL-17A，IL-17F，IL-23p19 、IL-21及转录因子RORgt mRNA表达水平。在TCR诱导纯化T细胞活化模型中，蠲痹颗粒醇提物体外给药亦减少Th17分化所需的关键细胞因子IL-6的分泌，综合上述研究结果推测，蠲痹颗粒醇提物药物可能通过干预Th17分化所需的关键细胞因子及转录因子的表达，阻止了CD4+T细胞向高致病性Th17细胞分化，同时通过减少IL-6的表达，上调具有免疫抑制功能Treg细胞的表达，从而维持Treg/Th17正常平衡，从而介导对RA的防治作用。
T细胞激活信号通过多种途径转导入细胞核，其中MAPK信号通路是参与TCR信号转导的重要途径。MAPK的三种主要成分：ERK、JNK以及P38均参与T细胞激活。MAPK信号通路的激活，分别导致不同核转录因的激活，调控T细胞增殖 、细胞因子分泌等[10]。蠲痹颗粒醇提物抑制免疫的分子机制，我们进一步应用Western blot 检测蠲痹颗粒醇提物对TCR信号诱导的纯化MAPK信号通路的影响，结果表明，蠲痹颗粒醇提物显著抑制ERK和P38的磷酸化水平，提示抑制MAPK信号通路，可能是蠲痹颗粒免疫抑制作用及治疗类风湿关节炎的分子机制之一。
温阳散寒除湿法调控Th17细胞/ Treg平衡和MAPK信号通路而介导治疗RA的作用， 这一作用机制可能为“温阳散寒除湿法治疗RA（寒湿痹阻）理论的现代生物学特征，本研究为扶阳学派及吴生元教授应用扶阳理论治疗RA临床提供科学基础，丰富和发展中医治疗痹证理论的科学内涵。
参考文献
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