3.4 蠲痹颗粒醇提物对CIA模型小鼠Treg/Th17平衡调控作用的影响
流式细胞术检测脾淋巴细胞CD4+ T细胞内的IL-17A表达情况。结果显示,与CIA模型对照组比较,蠲痹颗粒干预后,其IL-17A表达显著下调,差异有显著性意义(P<0.05)。Treg/Th17比值反应Treg/Th17平衡状态,结果显示,蠲痹颗粒干预后,显著增加Treg/Th17比值,差异有显著性意义(P<0.05)。
图4. 温阳散寒除湿法对CIA模型小鼠CD4+ T细胞胞内IL-17A表达的影响
各组1×106个小鼠脾淋巴细胞与PMA、Ionomycin以及BFA于5%CO2培养箱中共培养4h后,收集细胞,封闭FcR,进行表面标志染色。完毕后,固定、穿膜,加入荧光标记的抗IL-17、抗体,流式细胞仪检测分析。结果以mean±SD.表示。*P<0.05,**P<0.01,对照组vs蠲痹颗粒醇提物干预组
3.5 蠲痹颗粒醇提物对CIA模型小鼠Th17相关基因表达的影响
为进一步揭示蠲痹颗粒醇提物对Th17调控作用的机制,我们应用荧光定量PCR检测Th17相关基因表达水平,结果显示蠲痹颗粒醇提物显著抑制CIA模型小鼠脾淋巴细胞IL-17A、IL-17F、IL-21和IL-23p19的mRNA的表达水平,下调Th17转录因子RORgt的转录水平,差异有显著性意义(P<0.05)。
图4. 温阳散寒除湿法对CIA模型小鼠细胞Th17细胞相关基因表达的影响
抽提1×107个小鼠脾淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA。应用SYBR嵌合荧光法在实时定量PCR仪进行Th17细胞相关基因表达检测。结果以mean±SD.表示。*P<0.05,**P<0.01,对照组vs蠲痹颗粒醇提物干预组