温阳散寒除湿法对类风湿关节炎Th17/Treg细胞平衡调控作用及机制的研究(5)

　　3.6 蠲痹颗粒醇提物对TCR信号诱导的CD4+T淋巴细胞细胞因子产生的影响

　　为揭示蠲痹颗粒治疗类风湿关节炎的作用机制，本研究进一步应用ELISA法检测蠲痹颗粒醇提物对anti-CD3 mAb诱导CD4+T淋巴细胞细胞因子产生的影响。ELISA检测结果显示，结果如图6， 蠲痹颗粒醇提物药物干预后，显著降低Th1细胞因子（IFN-g）和Th17细胞因子（IL-17A）产生水平，差异有显著性意义（P<0.05和P<0.01）。同时显著提高负调控细胞因子IL-10的产生水平，降低促炎细胞因子IL-6水平，差异有显著意义（P<0.05）。

　　图 6. 蠲痹颗粒醇提物对anti-CD3 mAb诱导CD4+T淋巴细胞Th1/Th17细胞因子产生的影响。4×106/ml CD4+T淋巴细胞接种于anti-CD3 mAb(5mg/ml)包被的24孔板中，同时加入不同浓度的蠲痹颗粒醇提物，共培养36 h，离心收集培养上清 ( 5000 rpm，4℃，5 min )，ELISA法检测培养上清IL-17A（A）、IFN-g（B）、IL-6（C）和IL-10（D）的浓度。结果以mean±SD.表示。*P<0.05，**P<0.01，对照组vs蠲痹颗粒醇提物干预组。

　　3.7蠲痹颗粒醇提物对TCR信号诱导的CD4+T淋巴细胞MAPK信号通路的影响

　　MAPK信号通路是参与TCR信号转导的重要途径。为揭示蠲痹颗粒醇提物免疫抑制作用的分子机制，我们应用Western blot 检测MAPK信号通路P-38和ERK磷酸化水平，结果显示，蠲痹颗粒醇提物在30、100mg/ml显著抑制ERK的磷酸化水平，100mg/ml药物干预 明显下调P-38磷酸化。

　　图 7. 蠲痹颗粒醇提物对anti-CD3 mAb诱导CD4+T淋巴细胞MAPK信号通路的影响。4×106/ml CD4+T淋巴细胞接种于anti-CD3 mAb(5mg/ml)包被的24孔板中，同时加入不同浓度的蠲痹颗粒醇提物，作用1h，提取总蛋白，Western blot 法检测CD4+T淋巴细胞p38和ERK磷酸化水平。