β-PGG对高糖状态下INS-1细胞凋亡的保护作用(5)

　　收集对数生长期的INS-1细胞，各组细胞干预结束后按照试剂盒说明书检测细胞凋亡率。采用Annexin V/PI 双标染色，用流式细胞术检测β-PGG作用高糖状态下INS-1细胞48h后的凋亡情况，在高糖模型组中分别加入10-7、10-6、10-5的β-PGG作为低、中、高剂量组。结果如表5，图12-13所示。

　　实验结果表明：高糖模型组与对照组相比，凋亡率升高了84.4%（P<0.01），给予低、中、高 β-PGG作用INS-1细胞48h后，与模型组相比，分别降低了30.1%、35.0%、45.8% ( P<0.05 )，高剂量组抑制凋亡的程度最大。

　　注：高糖模型组与对照组比较数值★P<0.05；★★P<0.01

　　药物组与高糖模型组比较数值 ▲P<0.05；▲ ▲P<0.01

　　高糖毒性是诱导胰岛β细胞凋亡的主要原因之一。因此，对于糖毒性引起的胰岛β细胞凋亡的研究受到了广泛的关注。细胞凋亡最先是由 Kerr等[4]于1972年提出的，也称细胞程序性死亡，是指为维持内环境 <http://baike.baidu.com/view/134349.htm>稳定，由基因 <http://baike.baidu.com/view/8563.htm>控制的细胞自主的有序的死亡方式。它作为一种调节机体内在结构和功能相对稳定的调控机构，在生长、发育和受外界刺激时，清除多余、衰老和受损伤的细胞，与人体各系统、器官、组织的生理及病理状态有着极为密切的关系。根据文献报道,β细胞功能受损与β细胞数量减少有关，β细胞数量下降的主要原因是β细胞凋亡增加而非新生β细胞减少[5]。Butler A E等[1]大规模的尸检结果显示，2型糖尿病患者中β细胞数量明显减少，凋亡频率显著增高，但其增生、复制功能正常，这提示β细胞凋亡增加是其数目减少的根本原因。另外，Federici等[6]人发现在高糖条件下，人胰岛细胞凋亡水平明显升高，还有研究表明[35]，高糖毒性是诱导胰岛β细胞凋亡的主要原因。

　　本研究中，我们采用改良MTT法检测10-9～10-4mol/L的β-PGG浓度对高糖状态下INS-1细胞作用48h增殖的影响。以无糖RPMI1640完全培养基中添加11.1、24.6mmol/L的葡萄糖分别作为对照组和高糖模型组，用10-9～10-4mol/L的β-PGG分别处理对照组和高糖模型组细胞。研究发现，该浓度范围内的β-PGG对对照组细胞的存活率没有影响（P﹥0.05），详见表1，图1。当在高糖模型组中给予10-9、10-8mol/Lβ-PGG作用48h后，细胞存活率没有明显变化（P﹥0.05）；给予10-7、10-6、10-5mol/Lβ-PGG作用 48h后，细胞存活率分别上升了14.5%、17.5%、28.9% (P<0.05)，提示这3个剂量β-PGG有促进INS-1细胞增殖的作用；当给予10-4mol/Lβ-PGG后，细胞存活率与高糖模型组比较下降了14.7%(P<0.05)，提示10-4mol/Lβ-PGG对INS-1细胞具有毒性。因此，本研究接下来就把10-7、10-6、10-5mol/Lβ-PGG剂量确定为低、中、高剂量。