β-PGG对高糖状态下INS-1细胞凋亡的保护作用(2)

　　2、方法

　　2.1 培养基的配制

　　2.1.1  RPMI1640（无糖型）培养基的配制[3]

　　把含10.4g RPMI 1640 培养基干粉倒入烧杯中加三蒸水溶解后，用三蒸水清洗干粉瓶并倒入烧杯中，往烧杯中加NaHCO3 2.0g 、Hepes 2.38g、丙酮酸钠  0.11g，用 800ml 双蒸水溶解， 调节pH 值至 7.2～7.4，加入3.6μLβ-巯基乙醇，定容到 1000ml，0.22um 滤器除菌置-20℃储存。

　　2.1.2  RPMI1640（无糖型）完全培养基的配制

　　在RPMI1640 培养基中加入10%进口胎牛血清（FBS）及1%双抗，配成RPMI1640完全培养基。

　　2.1.3 正常对照和高糖模型组完全培养基的配制

　　在RPMI1640 （无糖型）完全培养基中分别加入2.0、4.4g葡萄糖，使其含11.1、24.6mmol/L浓度葡萄糖PRMI1640（无糖）完全培养基,分别为正常对照和高糖模型组。

　　2.2 细胞培养

　　将105/ml 密度的INS-1细胞液接种于含10%胎牛血清（FBS）的RPMI1640完全培养基中，细胞置于37℃，5％CO2饱和湿度培养箱中培养，随时观察细胞的状态和数量，及时换液和传代，待细胞进入对数生长期进行实验。

　　2.3 受试样品的制备

　　β-PGG用N.S配成10-3mol/L作为母液，样品溶解充分，再用N.S将受试样品稀释成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L6个浓度。

　　2.4 实验分组

　　（1）正常对照组：正常葡萄糖（11.1mmol/L）RPMI1640培养基培养的细胞。

　　（2）高糖模型组：高糖（24.6mmol/L）RPMI1640培养基培养的细胞。

　　（3）低剂量组：高糖（24.6mmol/L）RPMI1640培养基+10-7mol/L的β-PGG。

　　（4）中剂量组：高糖（24.6mmol/L）RPMI1640培养基+10-6mol/L的β-PGG。

　　（5）高剂量组：高糖（24.6mmol/L）RPMI1640培养基+10-5mol/L的β-PGG。