“拔伸松动手法”对兔膝骨性关节炎IL-1β、TNF-α的影响(2)

　　二、方法

　　1.制作动物模型：32只成年兔雌雄不限(含预实验兔2只)，稳定饲养7天，按Videman T的造模方法制作兔膝骨性关节炎模型，将兔右后肢伸直位管型石膏固定6周。

　　2.分组 动物模型随机分三组(即拔伸松动手法组、注射透明质酸钠组、模型组)及正常组，共四组进行实验。

　　2.1拔伸松动手法组(A组10只)以拔伸松动手法治疗兔右膝，专人操作，手法、操作步骤及时间固定。操作方法如下：

　　2.1.1手法：按揉法、拔伸松动法。

　　2.1.2取穴：膝眼、血海、鹤顶、阳陵泉、阴陵泉、足三里、委中等。

　　2.1.3操作：先按揉以上所取诸穴，20秒/穴，再施于以下手法：

　　①拔伸法施以患膝10秒后放松;②徐徐拔伸患膝，在拔伸下分别以小鱼际固定于膝关节下缘之内侧和外侧，向对侧推按5次(外侧向内侧，内侧向外侧);③五指提拿髌骨10次，顺时针和逆时针活动髌骨5次，再上下左右推动髌骨;④屈伸患膝关节30次;⑤拔伸患膝10秒，在拔伸过程中作膝关节小幅度内旋和外旋运动。⑥手法治疗每天一次，治疗十天后休息一天，共治疗6周。

　　2.2注射透明质酸钠组(B组10只)

　　2.2.1关节腔内注射药物：透明质酸钠( 山东正大福瑞达公司生产，国药准字H10960136)。规格2ml：20mg.0.15ml·kg-1。每周注射1次,共治疗6周。

　　2.2.2施术方法：采用髌骨外下缘(外侧膝眼)穿刺法：首先 定位：屈膝90度位，髌骨下缘、髌韧带外侧膝眼，可看到一小凹陷。然后：用指甲定位后，常规消毒患处，10号针头与胫骨平台平行，向内呈45度角，穿刺进入，回抽无血，将透明质酸钠液缓缓推入。拔出针头，屈伸兔膝关节数次。

　　2.3模型组(C组10只)仅给饲料喂养，服用6周。

　　2.4正常组(D组10只)仅给饲料喂养，服用6周。

　　三、观测指标：IL-1β、TNF-α含量测定。

　　具体方祛：施行膝关节穿刺，证实刺人关节腔后，注人0.9%的生理盐水0.5ml，反复回抽、注入3次后，再尽量抽出腔内液体。回收量0.4～0.6 ml，平均0.5 ml。采集的膝关节冲洗液按说明采用双抗体夹心(ELISA)法测定。