1.2提取与分离
大麻药根10.0 kg，经粉碎，用95%乙醇常温超声提取4次，过滤，合并滤液并浓缩得浸膏3.25 kg，将浸膏混悬于适量水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，将萃取液减压浓缩分别得到各个部分萃取物。乙酸乙酯萃取物(468.0 g)用柱层析硅胶(100~200目)进行层析，依次用V石油醚:V丙酮为50:1→0:1梯度洗脱，经TLC检测后合并相同组分，最后得10个组分(Fr. 1~Fr. 10)。对组分Fr.3~Fr.7分别经硅胶柱层析得亚组分，再经过Sephadex LH-20凝胶色谱、高效液相色谱等方法，纯化得11个单体化合物，其中从Fr.3获得化合物 5 (13.1 mg)， 4 (41.2 mg)，和6 (23.3 mg);从Fr.4分离得到化合物2 (8.3 mg)和3 (23.5 mg)和1 (12.6 mg);从Fr.5分离得到化合物7 (31.0 mg)和10 (63.9 mg);从Fr.6分离得到化合物11 (16.8 mg)、8 (13.1 mg)和9 (13.6 mg)。
2、结构鉴定
化合物1：白色无定形粉末，它的ESI-MS给出的准分子离子峰m/z 481[M+Na]+，由高分辨质谱(HR-ESI-MS)正离子模式得出来的分子量为m/z 459.3101[M+H]+(计算值458.3032)和NMR数据，推测其分子式为C28H42O5，不饱和度为8。红外IR(KBr)光谱在3424， 1652, 1416, 1083, 1020 和 668 cm-1处有吸收，表明化合物1含有羧基和双键结构。1H NMR谱(见表1)显示了六个甲基质子信号(δH 0.89, 0.96, 1.03, 1.17, 1.29, 2.37)和一个烯烃氢信号(δH 5.50, t, J=3.3 Hz)。13C和DEPT NMR谱中 (见表1) 显示了该化合物有28个碳信号，其中包含6个甲基信号(δC 17.2, 18.3, 23.6, 25.9, 31.6, 33.1)、1个孤立的羰基(δC 212.0)、2个羧基(δC 174.1, 182.4)和2个双键碳信号(δC 122.3, 144.4)。通过与化合物ivorengenin B[9]对比，表明化合物1是一个12-烯-裂环的降三萜骨架，主要区别在于化合物1缺少了一个含氧取代次甲基信号，多出一个亚甲基信号(δC 46.0)。以上推测进一步通过2D NMR数据得到确认，H2-19 (δH 1.70)和C-13 (δC 144.4)、C-18 (δC 41.9);H3-29 (δH 33.1)和C-19 (δC 46.1);H3-30 (δH 23.6和C-19的HMBC相关;以及H-18 (δH 3.24) 和H2-19的COSY相关，表明化合物1的19位比已知化合物ivorengenin B缺少了一个羟基取代。所以，通过进一步的HMBC及1H-1H COSY谱图分析(图2)，以及类似化合物NMR数据比对，最终确定了化合物1的平面结构，见图1。
通过ROESY谱图确定化合物1的相对构型。在ROESY谱图(图2)中，H-18与H-12、H-16β、H-19β、H3-29的相关，说明H-18为β构型。H-5和H-6α、H-9的相关，说明H-5为α构型。通过全面的ROESY谱图分析，可确定化合物1的相对构型与ivorengenin B完全一致。综上所述，确定该化合物为4-氧-3,24-双降-2,4-裂环-12-烯-2,28-齐墩果烷酸。
化合物2：白色无定形粉末，由高分辨质谱 (HR-EI-MS) 正离子模式得出来的分子量为466.2720[M+]。分子式为C29H38O5，分子中有11个不饱和度。红外IR (KBr) 光谱在3414, 1776, 1629, 760 cm-1处有吸收，表明分子中有羟基和羰基的存在。1H NMR谱图数据(见表1)显示了六个甲基质子信号(δH 0.92 ,0.94 , 0.98, 1.31, 1.38, 2.01)、一个烯烃氢信号(δH 6.48)和一个羟基信号(δH 6.45)。13C和DEPT NMR谱中 (见表1) 显示该化合物有29个碳信号(11个-C-，5个-CH-，7个-CH2-，6个-CH3)，其中包含2个羰基信号(δC 179.1, 181.6)、4个双键碳信号(δC 163.8, 145.0, 127.5, 123.3)、1个含氧取代的季碳信号(δC 87.3)和1个环氧结构的碳信号(δC 52.8, 57.5)。
通过与已知化合物asprellol C[10]对比，表明化合物2是一个24位-降型的三萜骨架。在HMBC谱中，H3-29 (δH 0.98) 和 C-30 (δC 23.7)的相关，且H3-29和H3-30同时与δC 31.6 (C-20)、37.8 (C-19)和34.4 (C-21)相关，说明在C-20位有双甲基的取代。然而，H3-23 (δH 2.01) 和 C-4 (δC 127.5)的HMBC相关，说明在C-4位只有一个甲基的信号，C-24号甲基极有可能脱去。此外，H2-6 (δH 2.50, 2.80)和C-4 (δC 127.5)，C-5 (δC 163.8)，C-10 (δC 42.4)的HMBC相关，进一步证实了C-6位确实是一个亚甲基基团，比化合物asprellol C缺少了一个羟基取代。所以，化合物2的平面结构得以确认。在REOSY谱中，H-11与H3-25、H-12与H3-25的相关，说明11α,12α-环氧结构的存在。通过全面的ROESY谱图(图2)分析，可确定化合物2的相对构型与asprellol C完全一致。综上所述，确定该化合物为2-羟基-3-氧-11α,12α-环氧-24-降型-1,4-二烯-28,13β-齐墩果烷内酯(图1)。