滇龙血竭对肺纤维化大鼠IL-2、IL-5的影响

景海卿 付义 杨春艳 张爱华

（昆明市中医医院）

（本论文荣获“第五届兰茂论坛”优秀论文三等奖）

　　摘要：目的：探讨滇龙血竭对肺纤维化大鼠免疫调节因子IL-2、IL-5的药效学作用。方法：采用经气管注入博莱霉素（BLM）法诱发SD大鼠PF模型。56只雄性SPF级SD大鼠，随机分为正常对照组、模型对照组以及滇龙血竭全程、早期、晚期干预组共5组。分别于制模后1d灌胃相应药物，连续用药并在相应时间点取材。检测诱导PF的关键免疫因子IL-2、IL-5，肺组织中羟脯氨酸（Hyp）的含量。结果：滇龙血竭早期全程干预可抑制大鼠IL-2表达水平(P<0.01)，上调IL-5表达水平(P<0.01)，减轻其肺纤维化程度，总体疗效以滇龙血竭全程干预组最佳。结论：具有云南民族医药特色的“龙血竭”通过调节相关免疫因子能够有效减缓博莱霉素诱发的实验性PF的肺纤维化进程。

　　关键词：龙血竭；肺纤维化；IL-2；IL-5

　　特发性肺间质纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis IPF) 是指原因不明，出现在成人，局限于肺，进行性致纤维化的间质性肺炎，其组织病理学和放射学表现为普通型间质性肺炎［1］。该病死亡率和预后与肺癌相当，乃众多肺系疾病中尚缺乏有效治疗手段的重大疑难危重病症。目前发病机制不明,现代医学治疗手段有限。

　　IPF可能是由多种原因共同作用导致机体免疫功能紊乱而发病。有诸多研究表明，由遗传因素到疾病发生，期间还需要蛋白质表达、免疫系统及细胞因子网络的调控。有研究证实该病发病过程中存在免疫细胞因子平衡失调,而且相关免疫细胞因子在该病的发病过程中起重要作用。2014年10月到2017年9月，我课题组通过探讨龙血竭对肺纤维化相关免疫调节因子IL-2、IL-5的影响研究，为阐明特发性肺纤维化的发病机制及治疗提供一些实验依据。

　　1材料与方法

　　1.1实验动物  选用SPF级大鼠56只，6周龄，雄性，体重200-300g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。动物实验许可证号：SCXK（湘）2013-0004。

　　1.2药物  龙血竭源自云南孟连产百合科植物剑叶龙血树[Dracaena cochinchinensis（Lour.）S.C.Chen]的含脂木材提取的树脂，由昆明市中医药制剂中心（GPP认证 滇：2010009HZ）制成干粉剂，分装高压灭菌，4℃保存。具体制备工艺（略）。

　　1.3试剂及仪器  IL-2（ELR-IL-2，RayBiotech），IL-5（LS-F11803，LSBio公司），羟脯氨酸检测试剂盒（K555-100，RayBiotech）。冷冻离心机（ThermoCL-31R，Thermo），恒温摇床（130-0530/40，北京六一仪器厂），漩涡振荡仪（XW-80A，Labnet）等。

　　1.4造模方法  参照文献方法[2]加以改进，用10%水合氯醛（0.3ml/kg）腹腔内注射麻醉，固定头和四肢，开口器固定口腔，拉出舌头，用压舌板压住舌腹，在额镜直视下，趁动物吸气瞬间迅速行气管插管，缓慢注入博来霉素（5mg/kg溶于0.9%氯化钠注射液0.3ml中），空白对照组注入等量生理盐水。注药后立即将大鼠直立，沿身体纵轴旋转3min使药液分布均匀。

　　1.5动物分组及给药  56只SD大鼠随机分为空白对照组（A）、模型对照组（B）、龙血竭全程干预组（C）、龙血竭早期干预组（D）、龙血竭晚期干预组（E）5大组，每组8只。参考人和动物体表面积折算的等效剂量比率表[3]，取等效量给药。以蒸馏水溶为3ml/只•天。空白对照组、模型对照组给予等量蒸馏水。从制模第2天开始定时灌胃（9-10Am），每日1次。至检查前12小时停药。各组给药内容及时段安排参见表1。

表1 大鼠分组及造模、给药、取材要点总表