杨坤芬 余影 姚发宪 刘启涛 张智诚 苏敏 王京昆
(云南省药物研究所 云南白药集团创新研发中心 云南省中医药学会中药(民族药)专业委员会)
(本论文荣获“第四届兰茂论坛”优秀论文三等奖)
摘要 目的：观察四个不同皂苷含量的SYC提取物与家兔完整皮肤多次接触后有无刺激性/腐蚀性及其刺激强度，并进行初步比较，为SYC提取物筛选适合的化妆品原料提供参考依据。方法：采用同体自身对照法，将每只家兔背部分为左上部、左中部、左下部、右上部、右中部五个区域，每个试验区给予面积约为2.5×2.5cm2。每天分别给予纯水、SYC-00、SYC-10、SYC-20、SYC-30一次，除左上部按0.5ml/次，其它均按0.5g/次，连续给予14天，末次给予后第1天观察结束解剖、取材。结果：①一般情况观察正常;②肉眼观察和组织病理学检查结果表明，四个SYC提取物可使家兔皮肤产生不同程度可逆刺激性反应，但无腐蚀性反应，且随给予时间延长刺激症状均能渐减轻或恢复。结论：批号20170401SYC的四个SYC提取物经家兔皮肤连续给予14天，致家兔皮肤产生可逆刺激性反应强度为SYC-30>SYC-20>SYC-10>SYC-00，但无腐蚀性反应。
关键词 SYC;皮肤;刺激性/腐蚀性
随着社会发展的日益加速，化妆品成了人民美化生活、增进身心健康的生活必需品。面对市场上琳琅满目的产品安全性如何，严格控制化妆品种类和质量尤为关键，我国现行《化妆品技术规范》(2015版)[1]和《化妆品新原料申报与审评指南》[2]规定了化妆品新原料及其产品安全性评价的毒理学测试要求。本研究采用与七叶一枝花性能相似，含有多种甾体皂苷且含量比七叶一枝花高的SYC提取物。参照七叶一枝花在化妆品如洗手液、洗面液等日用产品中的应用[3]，考虑SYC提取物可能对粘膜有一定刺激作用，试验通过观察四个不同皂苷含量的SYC提取物与家兔完整皮肤多次接触后有无刺激性/腐蚀性及其刺激强度，并进行初步比较，为SYC提取物筛选适合的化妆品原料提供参考依据。
1、材料方法
1.1 供试品
供试品一：SYC-00，棕黄色粉末，提取率7.8%;供试品二：SYC-10，棕黄色粉末，，提取率5.7%;供试品三：SYC-20，浅棕色粉末，提取率23.1%;供试品四：SYC-30，浅棕黄色粉末，提取率18.2%。上述四个供试品的批号均为20170401，生产日期均为2017.04.12，有效期均暂定2年。均由云南白药集团创新研发中心制剂研究室生产，云南白药集团创新研发中心项目管理部提供。
1.2溶媒对照 纯水，无色澄明液体，常温保存 ，来源于本中心ELIXTM+MiLi-Qsynthesis 纯水、超纯水系统制备。
1.3 配制方法 称取适量SYC并按各提取物与纯水的质量比(g：g)分别为SYC-00：纯水=3:1.2，SYC-10：纯水=3:1.2，SYC-20：纯水=3:1.5，SYC-30：纯水=3:1.5进行配制，成膏状。以每只动物给予0.5gSYC提取物计算，则本次试验中每只动物应给予膏状物的重量(g)=0.5*W1/W2(W1为膏状物重量，W2为SYC提取物重量)。
1.4动物 普通级新西兰家兔，体重3.1~3.5 kg，共4只，雌雄各半。动物生产许可证：SCXK(苏)2014-0005，由邳州市东方养殖有限公司提供，饲养于药物毒性筛查及研究实验室，实验动物使用许可证：SYXK(滇)K2012-0001，每日投放足量兔生长繁殖饲料及饮水，供动物自由采食和饮用。
1.5试验方法[4-5] 试验前一天将家兔背部去毛，每只家兔共制备五块，分别为左上部、左中部、左下部、右上部、右中部，每块去毛面积约3×3cm2，其中每个区域间隔4～5cm。分别对应给予纯水、SYC-00、SYC-10、SYC-20、SYC-30。纯水按0.5ml/只，四个供试品按“1.3配制方法”配制后，均按0.5g/只(以SYC提取物计)，每天1次，连续给予14天，末次给予后第1天观察结束后，所有动物麻醉放血牺牲，取给予部位皮肤及下层肌肉进行组织病理学检查。
2、结果
2.1 一般观察
实验期间每天观察每只动物的外观、皮毛、四肢、摄食、粪便等一般症状、体征等均无异常。
2.2 给药局部肉眼观察及评分情况
2.2.1 肉眼观察：
SYC-00：给予第2天1只动物出现轻度红斑，评分为1，给予第4天全部动物出现轻
度至明显红斑，评分为1~2;同时有1只动物出现轻微水肿，评分为1。14天给予期间，全部动物出现轻度~严重红斑(紫红色)至轻度焦痂形成，评分为1~4，仅1只动物出现轻微水肿，评分为1;末次给予后第1天，4只动物均未见完全恢复。
SYC-10：给予第2天1只动物出现轻度红斑，评分为1，给予第3天全部动物出现轻度至明显红斑，评分为1~2;同时有1只动物出现轻微水肿，评分为1;14天给予期间全部动物出现轻度~严重红斑(紫红色)至轻度焦痂形成，评分为1~4，2只动物出现轻微水肿，评分为1;其中2只动物分别于给予第6天、给予第14天完全恢复，余2只未完全恢复。
SYC-20：给予第2天1只动物出现明显红斑，评分为2，给予第3天全部动物出现轻度至中度红斑，评分为1~3;同时有2只动物出现轻微至轻度水肿，评分为1~2;14天给予期间全部动物出现轻度~严重红斑(紫红色)至轻度焦痂形成，评分为1~4，全部动物动物出现轻微至轻度水肿，评分为1~2;其中2只动物于给予第13天完全恢复，余2只未完全恢复。
SYC-30：给予第2天2只动物出现轻度至明显红斑，评分为1~2，给予第3天全部动物出现明显至中度红斑，评分为2~3，同时有3只动物出现轻微至中度水肿，评分为1~3;14天给予期间全部动物出现轻度~严重红斑(紫红色)至轻度焦痂形成，评分为1~4，全部动物动物出现轻微至中度水肿，评分为1~3;其中1只动物末次给予后第1天完全恢复，余3只未完全恢复。
纯水：14天给予期间，4只动物给予局部皮肤均未见红斑和水肿及其它刺激症状。
2.2.2 每一观察时间点的积分均值：
四个SYC提取物给予4只动物后均在给予第2天积分均值最低，SYC-00在给予第9天、SYC-10和SYC-20在给予第5天、SYC-30在给予第7天积分均值达到最高值。结果详见表1。
表1 每一观察时间点积分均值
2.2.3 观察期限内每天每只动物每块皮肤积分均值：
14天给予期间，四个SYC提取物给予4只动物积分均值分别为SYC-00：1.64、1.00、2.14、4.21;SYC-10：2.79、0.43、0.21、4.21;SYC-20：3.14、1.64、2.36、4.29;SYC-30：4.21、3.21、4.21、4.71。给予纯水的积分均值为0。结果详见表2。
表2 观察期限内每天每只动物每块皮肤积分均值
2.3 组织病理学检查
2.3.1肉眼观察：
SYC四个提取物自身对照家兔连续给予14天，末次给予后第1天肉眼观察左上部给予纯水所有动物皮肤均未见异常;左中部给予SYC-00所有动物见轻度至严重红斑，其中1只可见轻微水肿;左下部给予SYC-10的1只动物见轻微红斑，1只动物见中度红斑伴有轻微水肿;右上部给予SYC-20的1只动物见轻微红斑，1只动物见中度红斑;右中部给予SYC-30的3只动物见轻微至明显红斑。